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　　2、液相分离得到青黛酮。本发明工艺简单，得率高，产品质量好、纯度高。51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书2页CN102351870A1/1页21一种从菘蓝中提取青黛酮的方法，其特征在于包括以下步骤将菘蓝叶粉碎，经6095乙醇或甲醇溶液浸泡12H，加热至8095索氏提取提取210H，提取液减压回收至无醇味，加水分散，上柱分离，洗脱液浓缩，用萃取至萃余液中无生物碱反应，萃取液浓缩干燥得青黛酮粗品，用制备型高效液相色谱精制得到青黛酮对照品，纯度达98以上。2根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述上柱分离可采用大孔树脂柱分离或者离子树脂柱分离。3根据权利。

　　3、要求2所述的方法，其特征在于所述大孔树脂型号可选AB8、D101、HP20、LDA10等，洗脱溶剂为乙醇溶液，先用1020乙醇溶液洗脱，再用6080乙醇溶液洗脱，收集6080的乙醇洗脱液。4根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述离子树脂为羧甲基型弱酸性阳离子树脂，用体积百分比为15的氨水洗脱，洗脱液即为生物碱活性成分。5根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述制备型高效液相色谱色谱条件为流动相为乙腈水，流速2050ML/MIN。权利要求书CN102351863ACN102351870A1/2页3一种从菘蓝中提取青黛酮的方法技术领域0001本发明属于医药技术领域，涉及一种从菘蓝中提取青黛酮的方。

　　4、法。背景技术0002菘蓝，拉丁植物名ISATISINDIGOTICAFORTUNE，别名茶蓝、板蓝根、大青叶。性味味苦，性寒。归经归肝；胃经。功能清热解毒，凉血消斑。主治用于温病发热，发斑，风热感冒，咽喉肿痛。丹毒，流行性乙型脑炎、肝炎和腮腺炎等症。主要分布于内蒙古、陕西、甘肃、河北、山东、江苏、浙江、安徽、贵州等地。0003青黛酮，暗紫色细针晶，吲哚类生物碱，化学号97457313，分子式C23H13N3O2，分子量36338。来源于菘蓝的茎叶，具有抗肿瘤活性。对小鼠LEWIS肺癌及黑色素瘤细胞株B16均有抑制作用。0004目前，对青黛酮的研究较少，经检索，尚未发现适宜于大量制备青黛酮的工业。

　　5、化方法的公开报道。发明内容0005针对上述情况，本发明的目的是提供一种从菘蓝中提取青黛酮的方法，可有效解决从菘蓝中提取青黛酮的问题。0006本发明的技术构思是这样的将菘蓝叶粉碎，经6095乙醇或甲醇溶液浸泡12H，加热至8095索氏提取提取210H，提取液减压回收至无醇味，加水分散，上柱分离，洗脱液浓缩，用萃取至萃余液中无生物碱反应，萃取液浓缩干燥得青黛酮粗品，用制备型高效液相色谱精制得到青黛酮对照品，纯度达98以上。0007所述上柱分离可采用大孔树脂柱分离或者离子树脂柱分离。0008所述大孔树脂型号可选AB8、D101、HP20、HZ841、LDA10等，洗脱溶剂为乙醇溶液，先用1020。

　　6、乙醇溶液洗脱，再用6080乙醇溶液洗脱，收集6080的乙醇洗脱液。0009所述离子树脂为羧甲基型弱酸性阳离子树脂，用体积百分比为15的氨水洗脱，洗脱液即为生物碱活性成分。0010所述制备型高效液相色谱色谱条件为流动相为乙腈水，流速2050ML/MIN。0011本发明的有益效果是采用索氏提取，可实现连续提取，同时浓缩提取液，既节约溶剂，又提高了萃取率；通过大孔树脂或离子树脂分离，初步提高了产品的纯度；采用制备型高效液相色谱精制纯化，纯度高达98以上，所得产品可作为对照品使用，同时可进行大量制备；本发明工艺稳定，可用于工业化生产。具体实施方式0012下面结合具体实施方式对本发明进行进一步说明。00。

　　7、13实施例1将菘蓝茎叶粉碎，称取1000G，加入相当于原料量3倍的95甲醇溶液浸泡2H，然后加说明书CN102351863ACN102351870A2/2页4热至84索氏提取6H，收集提取液取液减压回收甲醇至无醇味，加水溶解分散，离心，上清液上HZ841大孔吸附树脂柱，先用20乙醇溶液冲柱至洗脱液流出无色，再用60乙醇溶液洗脱，收集60乙醇洗脱液，减压浓缩，用反复萃取6次，萃取液浓缩干燥得青黛酮粗品。将青黛酮粗品用甲醇溶解，微孔滤膜滤过，经制备高效液相色谱分离，色谱柱C18，流动相乙腈水（6832），流速25ML/MIN，以紫外检测器检测指导产品收集，连续进样，收集含有青黛酮的高纯度流分，。

　　8、浓缩干燥得产品32MG，含量为981。0014实施例2将菘蓝茎叶粉碎，称取1000G，加入相当于原料量5倍的75乙醇溶液浸泡2H，然后加热至93索氏提取8H，收集提取液取液减压回收乙醇至无醇味，加水溶解分散，离心，上清液上羧甲基型弱酸性阳离子树脂柱，先用水冲柱至洗脱液流出无色，再用体积百分比为5的氨水洗脱，收集氨水洗脱液，减压浓缩，用反复萃取5次，萃取液浓缩干燥得青黛酮粗品。将青黛酮粗品用甲醇溶解，微孔滤膜滤过，经制备高效液相色谱分离，色谱柱C18，流动相乙腈水（6040），流速20ML/MIN，以紫外检测器检测指导产品收集，连续进样，收集含有青黛酮的高纯度流分，浓缩干燥得产品28MG，含。

　　9、量为985。0015实施例3将菘蓝茎叶粉碎，称取1000G，加入相当于原料量4倍的60甲醇溶液浸泡1H，然后加热至85索氏提取10H，收集提取液取液减压回收甲醇至无醇味，加水溶解分散，离心，上清液上D101大孔吸附树脂柱，先用10乙醇溶液冲柱至洗脱液流出无色，再用80乙醇溶液洗脱，收集75乙醇洗脱液，减压浓缩，用反复萃取3次，萃取液浓缩干燥得青黛酮粗品。将青黛酮粗品用甲醇溶解，微孔滤膜滤过，经制备高效液相色谱分离，色谱柱C18，流动相乙腈水（6238），流速50ML/MIN，以紫外检测器检测指导产品收集，连续进样，收集含有青黛酮的高纯度流分，浓缩干燥得产品45MG，含量为984。0016实。

　　10、施例4将菘蓝茎叶粉碎，称取1000G，加入相当于原料量3倍的80乙醇溶液浸泡1H，然后加热至80索氏提取2H，收集提取液取液减压回收乙醇至无醇味，加水溶解分散，离心，上清液上羧甲基型弱酸性阳离子树脂柱，先用水冲柱至洗脱液流出无色，再用体积百分比为1的氨水洗脱，收集氨水洗脱液，减压浓缩，用反复萃取4次，萃取液浓缩干燥得青黛酮粗品。将青黛酮粗品用甲醇溶解，微孔滤膜滤过，经制备高效液相色谱分离，色谱柱C18，流动相乙腈水（7030），流速40ML/MIN，以紫外检测器检测指导产品收集，连续进样，收集含有青黛酮的高纯度流分，浓缩干燥得产品62MG，含量为982。0017实施例5将菘蓝茎叶粉碎，称取1000G，加入相当于原料量6倍的70甲醇溶液浸泡2H，然后加热至95索氏提取5H，收集提取液取液减压回收甲醇至无醇味，加水溶解分散，离心，上清液上LDA10大孔吸附树脂柱，先用15乙醇溶液冲柱至洗脱液流出无色，再用70乙醇溶液洗脱，收集70乙醇洗脱液，减压浓缩，用反复萃取5次，萃取液浓缩干燥得青黛酮粗品。将青黛酮粗品用甲醇溶解，微孔滤膜滤过，经制备高效液相色谱分离，色谱柱C18，流动相乙腈水（6535），流速35ML/MIN，以紫外检测器检测指导产品收集，连续进样，收集含有青黛酮的高纯度流分，浓缩干燥得产品27MG，含量为988。说明书CN102351863A。

　　实施例 1 ： 将菘蓝茎叶粉碎， 称取 1000g， 加入相当于原料量 3 倍的 95% 甲醇溶液浸泡 2h， 然后加热至 84℃索氏提取 6h， 收集提取液取液减压回收甲醇至无醇味， 加水溶解分散， 离心， 上清 液上 HZ841 大孔吸附树脂柱， 先用 20% 乙醇溶液冲柱至洗脱液流出无色， 再用 60% 乙醇溶液 洗脱， 收集 60% 乙醇洗脱液， 减压浓缩， 用反复萃取 6 次， 萃取液浓缩干燥得青黛酮粗 品。 将青黛酮粗品用甲醇溶解， 微孔滤膜滤过， 经制备高效液相色谱分离， 色谱柱 ： C18， 流动 相： 乙腈 - 水 （68:32） ， 流速 25ml/min， 以紫外检测器检测指导产品收集， 连续进样， 收集含 有青黛酮的高纯度流分， 浓缩干燥得产品 32mg， 含量为 98.1%。

　　实施例 2 ： 将菘蓝茎叶粉碎， 称取 1000g， 加入相当于原料量 5 倍的 75% 乙醇溶液浸泡 2h， 然后加 热至 93℃索氏提取 8h， 收集提取液取液减压回收乙醇至无醇味， 加水溶解分散， 离心， 上清 液上羧甲基型弱酸性阳离子树脂柱， 先用水冲柱至洗脱液流出无色， 再用体积百分比为 5% 的氨水洗脱， 收集氨水洗脱液， 减压浓缩， 用反复萃取 5 次， 萃取液浓缩干燥得青黛酮 粗品。 将青黛酮粗品用甲醇溶解， 微孔滤膜滤过， 经制备高效液相色谱分离， 色谱柱 ： C18， 流 动相 ： 乙腈 - 水 （60:40） ， 流速 20ml/min， 以紫外检测器检测指导产品收集， 连续进样， 收集 含有青黛酮的高纯度流分， 浓缩干燥得产品 28mg， 含量为 98.5%。

　　实施例 3 ： 将菘蓝茎叶粉碎， 称取 1000g， 加入相当于原料量 4 倍的 60% 甲醇溶液浸泡 1h， 然后加 热至 85℃索氏提取 10h， 收集提取液取液减压回收甲醇至无醇味， 加水溶解分散， 离心， 上 清液上 D101 大孔吸附树脂柱， 先用 10% 乙醇溶液冲柱至洗脱液流出无色， 再用 80% 乙醇溶 液洗脱， 收集 75% 乙醇洗脱液， 减压浓缩， 用反复萃取 3 次， 萃取液浓缩干燥得青黛酮粗 品。 将青黛酮粗品用甲醇溶解， 微孔滤膜滤过， 经制备高效液相色谱分离， 色谱柱 ： C18， 流动 相： 乙腈 - 水 （62:38） ， 流速 50ml/min， 以紫外检测器检测指导产品收集， 连续进样， 收集含 有青黛酮的高纯度流分， 浓缩干燥得产品 45mg， 含量为 98.4%。

　　实施例 4 ： 将菘蓝茎叶粉碎， 称取 1000g， 加入相当于原料量 3 倍的 80% 乙醇溶液浸泡 1h， 然后加 热至 80℃索氏提取 2h， 收集提取液取液减压回收乙醇至无醇味， 加水溶解分散， 离心， 上清 液上羧甲基型弱酸性阳离子树脂柱， 先用水冲柱至洗脱液流出无色， 再用体积百分比为 1% 的氨水洗脱， 收集氨水洗脱液， 减压浓缩， 用反复萃取 4 次， 萃取液浓缩干燥得青黛酮 粗品。 将青黛酮粗品用甲醇溶解， 微孔滤膜滤过， 经制备高效液相色谱分离， 色谱柱 ： C18， 流 动相 ： 乙腈 - 水 （70:30） ， 流速 40ml/min， 以紫外检测器检测指导产品收集， 连续进样， 收集 含有青黛酮的高纯度流分， 浓缩干燥得产品 62mg， 含量为 98.2%。

　　实施例 5 ： 将菘蓝茎叶粉碎， 称取 1000g， 加入相当于原料量 6 倍的 70% 甲醇溶液浸泡 2h， 然后加 热至 95℃索氏提取 5h， 收集提取液取液减压回收甲醇至无醇味， 加水溶解分散， 离心， 上清 液上 LDA-10 大孔吸附树脂柱， 先用 15% 乙醇溶液冲柱至洗脱液流出无色， 再用 70% 乙醇溶 液洗脱， 收集 70% 乙醇洗脱液， 减压浓缩， 用反复萃取 5 次， 萃取液浓缩干燥得青黛酮粗 品。 将青黛酮粗品用甲醇溶解， 微孔滤膜滤过， 经制备高效液相色谱分离， 色谱柱 ： C18， 流动 相： 乙腈 - 水 （65:35） ， 流速 35ml/min， 以紫外检测器检测指导产品收集， 连续进样， 收集含 有青黛酮的高纯度流分， 浓缩干燥得产品 27mg， 含量为 98.8%。4